脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

1、細(xì)胞H9C2 (Hela) 6孔板Hela1x10°/孔。

2、轉(zhuǎn)染前換上沒(méi)有抗sheng素的DMEM+胎清(10%)。

3、將質(zhì)粒DNA (約2-4ul) 2ul 加入dorf管中+DMEM至50u1。

4、脂質(zhì)體5ul補(bǔ)培養(yǎng)基至50ul混勻靜止5分鐘(質(zhì)粒與脂質(zhì)體比例為1:2或1.5:2.5)。

5、將含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基與含質(zhì)粒的混合總體積100ul室溫放置30分鐘。

6、吸取混合物均勻加入每一個(gè)孔中。

7、將6孔板放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)后吸出培養(yǎng)基換上新配置的培養(yǎng)基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。

8、培養(yǎng)24小時(shí)。

骨sui內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)

方法:使用密度梯度離

心法汲差速貼壁法聯(lián)合的方法培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及形態(tài)變化，使用Dil標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標(biāo)記的荊豆凝集素1雙熒光染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原CD34、CD133 表達(dá)情況.結(jié)果與結(jié)論:培養(yǎng)前4 d細(xì)胞增殖不明顯第5~10天迅速增殖，原代細(xì)胞，并可見(jiàn)細(xì)胞集落及線(xiàn)狀結(jié)構(gòu)形成培養(yǎng)第7天的內(nèi)皮祖細(xì)胞具有吞噬Dil標(biāo)記的乙酰化低密度脂蛋白和FITC標(biāo)記的荊豆凝集素1的功能流式細(xì)胞儀檢測(cè)體外培養(yǎng)第十天的細(xì)胞，CD133+細(xì)胞占19.2%，CD34+細(xì)胞占28.7%，CD34+ /CD133+細(xì)胞占19.1%.說(shuō)明密度梯度離心法聯(lián)合差速貼壁法可在體外有效分離培養(yǎng)大鼠骨sui內(nèi)皮祖細(xì)胞.

細(xì)胞增殖檢測(cè)

     本公司應(yīng)用MTT比色法， 檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)。其檢測(cè)原理為huo細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源性無(wú)色的MTT形成藍(lán)色的結(jié)晶Formazan，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二jia基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的Formazan，用酶聯(lián)mian疫檢測(cè)儀在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映huo細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

     該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫liu藥wu篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、以及腫liu放she敏***測(cè)定等。服務(wù)內(nèi)容      1. 細(xì)胞接種：收到客戶(hù)細(xì)胞后，我們會(huì)用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞，得出細(xì)胞懸液濃度。計(jì)算出應(yīng)稀釋的倍數(shù)，按MTT***盒要求在96孔板內(nèi)接種 相應(yīng)濃度的細(xì)胞懸液；

     2. 細(xì)胞培養(yǎng)：然后在無(wú)菌恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)接種好的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，并實(shí)時(shí)觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)；  

     3. yao物處理并呈色：按不同濃度梯度加入yao物作用細(xì)胞；

     4. 溶解，寶雞細(xì)胞，比色：加入MTT檢測(cè)***，按操作要求孵育相應(yīng)時(shí)間，在mei標(biāo)儀內(nèi)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結(jié)果。

寶雞細(xì)胞-原代細(xì)胞-英瀚斯(推薦商家)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司在技術(shù)合作這一領(lǐng)域傾注了諸多的熱忱和熱情，英瀚斯一直以客戶(hù)為中心、為客戶(hù)創(chuàng)造價(jià)值的理念、以品質(zhì)、服務(wù)來(lái)贏(yíng)得市場(chǎng)，衷心希望能與社會(huì)各界合作，共創(chuàng)成功，共創(chuàng)輝煌。相關(guān)業(yè)務(wù)歡迎垂詢(xún)，聯(lián)系人：戴經(jīng)理。