自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器，終將吞食物在溶酶體內降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構，內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物，青海細胞，損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、

病毒和***等。單丹磺酰尸胺(Dansylcad***erine，MDC是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，流式細胞檢測，通常被于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑，其檢測激發(fā)濾光片波長355nm ，阻斷濾光片波長512nm。Leagene MDC染色液適用于培養(yǎng)細胞的自噬染色，可與EB合用雙染。

大鼠主動脈內皮細胞的分離培養(yǎng)

方法：分離大鼠主動脈，直接貼壁于培養(yǎng)皿中，熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，免yi組化Ⅷ因子相關抗原染色鑒定細胞.結果:約24小時***塊邊緣有游離的 新生細胞長出，7天即融合成片.消化傳代后細胞呈短梭形或三角形，單層生長，鋪路石狀，Ⅷ因子表達陽性，細胞生物學，呈指數增殖.凍存后復蘇細胞活性均超過90%.結 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內皮細胞體外培養(yǎng)方法，凍存細胞存活率高，為體外研究提供了穩(wěn)定的模型.

細胞凍存有哪些注意事項？

細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是的。

細胞凍存的步驟：

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的凍存培養(yǎng)液;

取對數生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗。

去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養(yǎng)皿表面) 把單層生長的細胞消化下來;

離心 1000rpm，5min;

去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節(jié)凍存液中細胞的終密度為 5×106/ml~1×107/ml;

將細胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;

在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;

凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，細胞實驗，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

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