難點與關(guān)鍵點

將灌注針插入主動脈內(nèi)是灌注固定的關(guān)鍵，也是難點。首先準(zhǔn)確找到主動脈，這是此步驟的要點?？捎脺厣睇}水將胸腔內(nèi)的血液沖洗干凈，用鑷子輕輕夾住心 外膜（夾的越少越好，以免影響取材）將心臟向左上方提起，即可看清主動脈，又可使灌注針很容易地插入主動脈內(nèi)。插入時動作要慢，實驗動物，針尖方向不要偏向右側(cè)，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，則將針退后、調(diào)整方向重新進(jìn)針，直到進(jìn)入主動脈，灌注針進(jìn)入主動脈后可在心臟的上方看到其位置，灌注針進(jìn)入主動脈的長度 好為 3~5 毫米，然后用絲線扎緊。切勿將灌注針放在左心室內(nèi)，這樣由于主動脈瓣的關(guān)閉，灌注液很難進(jìn)入主動脈，而是沿著心室的切口流出，致使灌注失敗。另 外，灌注針插入成功后，一定要用剪刀剪開右心耳而不是右心室，這是灌流液的出口。剪開心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注針插入右心室。

灌注固定主要用于***系統(tǒng)，其他***意義不是很大，而且耗時耗力。對***系統(tǒng)防止變性效果較好！

小鼠灌注

灌流固定小鼠時一般采用輸液器的針頭 (4 號半，這樣肉眼可見就是肺部明顯充氣脹大變白，針頭要從心軸方向進(jìn)針，然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，開始灌流后剪破右心耳，約 40 毫升生理鹽水，可以做動物實驗的公司，后再灌流約 20 毫升多聚甲醛，整個灌流固定的過程就完成了。

灌注固定主要用于***系統(tǒng)，其他***意義不是很大，而且耗時耗力。對***系統(tǒng)防止變性效果較好！

小鼠灌注

灌流固定小鼠時一般采用輸液器的針頭 (4 號半，這樣肉眼可見就是肺部明顯充氣脹大變白，針頭要從心軸方向進(jìn)針，然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，開始灌流后剪破右心耳，約 40 毫升生理鹽水，后再灌流約 20 毫升多聚甲醛，動物實驗室，整個灌流固定的過程就完成了。

因 SP 是單只大鼠進(jìn)行實驗且在實驗中大鼠的活動空間受限，故有學(xué)者認(rèn)為以上的臨床與實驗室表現(xiàn)可能與大鼠的群體隔離或活動空間受限有關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在實驗前群體飼養(yǎng)的動物當(dāng)與群體隔離后也會出現(xiàn)攻擊行為增加，血漿中 CORT 增加，功能***等表現(xiàn)。大鼠活動空間受限也可引起血漿中 CORT 的水平的增加，這些結(jié)果與單平臺睡眠剝奪實驗中見到的類似，為克服SP 中大鼠與群體分離及活動空間受限的缺點，在 SP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)展為多平臺睡眠剝奪法。

1.2多平臺睡眠剝奪法

M P法于1981年先應(yīng)用在大鼠睡眠剝奪實驗中，在 M P中為擴(kuò)展大鼠的活動空間將臺由 SP 中的 1 個增加至 7 個，仍將1只大鼠放在臺間進(jìn)行睡眠剝奪試驗，因大鼠可以在 7個臺間自由活動，故活動范圍較 SP 中有明顯增大。經(jīng)實驗比較，在M P中反映應(yīng)激增強(qiáng)的一些指標(biāo)，如上腺重量增加和胸腺重量減少仍然存在，動物實驗，甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及上腺重量的增加較SP的更高，提示 M P較SP有更強(qiáng)的應(yīng)激性!考慮到大鼠為群居動物，單只大鼠實驗易導(dǎo)致與所在群體的隔離。為克服群體隔離所帶來的應(yīng)激反應(yīng)，有學(xué)者將 M P 法進(jìn)一步改良發(fā)展為改良多平臺睡眠剝奪法!