細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，iPS細胞相關(guān)，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數(shù)，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

營養(yǎng)條件

1．培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)基包含細胞生長所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、***等。針對不同細胞的營養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是細胞外基質(zhì)、生長因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血1清。要根據(jù)不同的細胞和不同的研究目的決定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能維持細胞較快的生長增殖速度，稱為生長培養(yǎng)液；為維持細胞緩慢生長或不死，添加2%～5%的血1清即可，稱為維持培養(yǎng)液。但血1清中也存在***于細胞生長和繁殖的物質(zhì)，如補體、免1疫球蛋白和一些生長***因子；成分不明確，影響對結(jié)果的分析；不同動物、不同批次的血1清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。

谷氨酰胺是細胞生長重要的氮源，在細胞生長代謝過程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

細胞復(fù)蘇

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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