iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation，同位素標(biāo)記相對(duì)和絕1對(duì)定量)是由AB SCIEX公司研發(fā)的一種體外同重同位素標(biāo)記的相對(duì)與絕1對(duì)定量技術(shù)。該技術(shù)使用8種（或4種）不同的同位素***來(lái)同時(shí)標(biāo)記和比較8種（或4種）不同的蛋白質(zhì)樣品。這些***由3個(gè)不同的化學(xué)標(biāo)簽組成：報(bào)告部分，肽反應(yīng)部分和平衡部分。報(bào)告部分為客戶可按需選擇標(biāo)記個(gè)數(shù)，肽反應(yīng)基團(tuán)將iTRAQ標(biāo)簽與肽段的N-端基團(tuán)和每個(gè)賴氨酸側(cè)鏈相連，可標(biāo)記所有酶解肽段，平衡部位可保證iTRAQ***標(biāo)記的不同樣本的同一肽段具有相同的質(zhì)荷比，因此改變?nèi)我籭TRAQ***，不同同位素在標(biāo)記同一多肽后在一級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，分子量都完全相同。而在串聯(lián)質(zhì)譜中，同重元素標(biāo)記肽段平衡基團(tuán)在二級(jí)質(zhì)譜發(fā)生中性丟失。信號(hào)離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比的峰，胞外囊泡粒徑及濃度測(cè)試服務(wù)，因此，根據(jù)波峰的高度及面積，可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。

外泌體上的TNF家族蛋白不能被膜型金屬蛋白酶切割，故較為穩(wěn)定，同時(shí)借助膜形成三聚體，具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性。而且，人們認(rèn)為外泌體的轉(zhuǎn)運(yùn)TNF家族蛋白，與各種炎1癥***和自身免1疫***的產(chǎn)生相關(guān)。

例如，從類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞中釋放出來(lái)的外泌體上，聚集高濃度的膜結(jié)合型TNF-α，會(huì)加重類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎病情。

樣本準(zhǔn)備

1. 提供外泌體懸液即可，未純化樣本也可以上機(jī)檢測(cè)；

注意：NTA僅提供粒徑分布情況和顆粒濃度，無(wú)法區(qū)分外泌體與非外泌體成分；當(dāng)然也可先利用外泌體特異性標(biāo)記物進(jìn)行熒光標(biāo)記，則可以獲知外泌體特定亞群的含量。

2.儀器的檢測(cè)區(qū)間是10^7 particles/ml，且有濃度檢測(cè)下限，為10^5 particles/ml，進(jìn)樣量不少于2ml；一般來(lái)說(shuō)，會(huì)對(duì)樣本稀釋后進(jìn)樣；

我司無(wú)法準(zhǔn)確建議送樣量；檢測(cè)需要量與樣本本身濃度有關(guān)，樣本濃，則用量小，反之則多，根據(jù)檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，樣本取用量一般在2μl-100μl不等，取用量大于50μl時(shí)大多由于樣本分泌量過(guò)低、提取失敗或者對(duì)樣本有過(guò)多稀釋。一般建議送樣量不低于30μl，如樣本珍貴，可聯(lián)系我司寄回，運(yùn)費(fèi)視具體情況收取。

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